|
|
卵巢組織使用玻璃化冷凍及慢速冷凍的差別 |
2016-08-03 |
|
奇美醫院生殖醫學科技術員 陳姵君
|
早在1987年,就有Grischenko等人的團隊,為罹癌的年輕女性冷凍卵巢組織,在經過化療之後再移植入體內,後續也成功誘導排卵並且活產。而利用慢速冷凍(controlled-rate freezing)的方法來保存卵巢組織,是一個已經被廣泛接受的方法,為了更進一步改善解凍後組織的完整性,包括基質細胞(stroma cell)的保存,本文設計實驗進行了慢速冷凍跟玻璃化冷凍(vtrification)的比較。組織來源是二十位剖腹產的婦女捐贈,隨機分組冷凍後解凍,與未冷凍直接切片的檢體比較,利用一般光學及電子顯微鏡觀察,比較冷凍前控制組及解凍後培養24小時之卵細胞(oocyte)、顆粒細胞(granulosa cell)及卵巢基質細胞的存活率及差異性。
慢速冷凍的冷凍保護劑,一組用的是1,2-propanediol (PrOH)-sucrose,另一組是ethylene glycol (EG)-sucrose,玻璃化冷凍則是都用dimethyl sulphoxide (DMSO)、PrOH、EG and polyvinylpyrrolidone(PVP)的混合溶液,但組織浸泡培養的時間分為二組,一組五分鐘,另一組十分鐘。分組冷凍後解凍,培養24小時後切片觀察。結果是無論使用慢速冷凍或玻璃化冷凍,由外觀型態來看都大致上保存良好,解凍後follicle存活率的損壞分級(Int:完整,Inf:50%以上完整,Deg: 50%以上損壞)結果也相近。但是在stroma cell 部分,玻璃化冷凍的表現明顯較好。
再進一步用電子顯微鏡細看,可以發現用玻璃化冷凍的方法,相較於慢速冷凍,組織解凍後,其對於卵巢基質細胞及粒線體等等胞器的保存明顯較好,而且具統計學差異(P<0.001),尤其在基質細胞的胞器及細胞架構的完整性。卵巢的基質由許多血管跟粒線體之類的胞器構成,假若解凍後保存完整的話,相信會增進移植後的組織細胞及濾泡的存活率,期待後續研究加以佐證。
|
|
|